KV1.6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409638

Panoramica

KCNA6 codifica la subunità del canale del potassio voltaggio-dipendente KV1.6, un rettificatore ritardato correlato a Shaker che modella la ripolarizzazione del potenziale d’azione e regola la frequenza di scarica neuronale. Contribuendo alla stabilità del potenziale di membrana e all’eccitabilità, KV1.6 influenza la segnalazione sinaptica e le oscillazioni di rete, integrandosi nei processi di segnalazione elettrica controllati dal flusso ionico voltaggio-dipendente. I canali della famiglia KV1 partecipano a vie che modulano il rilascio di neurotrasmettitori, la conduzione assonale e l’eccitabilità dipendente dall’attività, e un’alterata conduttanza del potassio è ampiamente rilevante per i disturbi di ipereccitabilità neuronale. Variazioni o un’espressione disregolata dei geni dei canali K⁺ voltaggio-dipendenti sono state associate a fenotipi neurologici, a supporto dell’uso della perturbazione di KCNA6 per studiare meccanismi legati all’eccitabilità in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KV1.6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCNA6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCNA6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCNA6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KV1.6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCNA6 per lo studio della segnalazione di KV1.6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KCNA6 critici per la funzione di KV1.6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCNA6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KV1.6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KV1.6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCNA6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KV1.6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KV1.6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCNA6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCNA6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.