KV1.6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409638

Übersicht

KCNA6 kodiert die spannungsabhängige Kaliumkanal-Untereinheit KV1.6, einen Shaker-verwandten verzögert gleichrichtenden Kanal, der die Repolarisation des Aktionspotenzials formt und die neuronale Feuerfrequenz reguliert. Durch seinen Beitrag zur Stabilität des Membranpotenzials und zur Erregbarkeit beeinflusst KV1.6 die synaptische Signalübertragung und Netzwerkoszillationen und ist in elektrische Signalprozesse eingebunden, die durch spannungsabhängige Ionenflüsse gesteuert werden. Kanäle der KV1-Familie sind an Signalwegen beteiligt, die die Neurotransmitterfreisetzung, die axonale Erregungsleitung und die aktivitätsabhängige Erregbarkeit modulieren, und eine veränderte Kaliumleitfähigkeit ist allgemein für Erkrankungen mit neuronaler Übererregbarkeit relevant. Varianten oder eine dysregulierte Expression in Genen spannungsabhängiger K⁺-Kanäle wurden mit neurologischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was den Einsatz von KCNA6-„Perturbationen“ zur Untersuchung erregbarkeitsgekoppelter Mechanismen in menschlichen Zellmodellen unterstützt.

Das KV1.6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KCNA6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KCNA6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KCNA6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KV1.6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KCNA6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KV1.6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KCNA6-Exone abzielen, die für die KV1.6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KCNA6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KV1.6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KV1.6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KCNA6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KV1.6 HDR-Plasmid (h) und KV1.6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KCNA6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KCNA6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.