KV1.3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421214

Panoramica

Kcna3 codifica il canale del potassio voltaggio-dipendente KV1.3, un canale della famiglia Shaker che regola il potenziale di membrana e l’efflusso di potassio, contribuendo a modulare la segnalazione del calcio, le soglie di attivazione e l’eccitabilità elettrica. Nelle cellule immunitarie e gliali, l’attività di KV1.3 influenza cascate di segnalazione legate alla proliferazione, alla produzione di citochine e alla riprogrammazione metabolica, controllando programmi trascrizionali dipendenti dal Ca2+. La funzione del canale si intreccia con vie che regolano la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress, e un’alterazione dell’attività di KV1.3 è stata associata a disregolazione immunitaria e a meccanismi infiammatori. Nel sistema nervoso, KV1.3 contribuisce all’eccitabilità e alle dinamiche di segnalazione rilevanti per la neuroinfiammazione e la comunicazione tra neuroni e cellule gliali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KV1.3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Kcna3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Kcna3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Kcna3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KV1.3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Kcna3 per lo studio della segnalazione di KV1.3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Kcna3 critici per la funzione di KV1.3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Kcna3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KV1.3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal KV1.3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Kcna3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KV1.3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR KV1.3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Kcna3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Kcna3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.