KV1.3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421214
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- KV1.3 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico KV1.3, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:KV1.3 Anticorpo (G-9): sc-398855
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
KV1.3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421214 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Kcna3 codifica o canal de potássio dependente de voltagem KV1.3, um canal da família Shaker que regula o potencial de membrana e o efluxo de potássio para modular a sinalização de cálcio, os limiares de ativação e a excitabilidade elétrica. Em células imunes e gliais, a atividade de KV1.3 influencia cascatas de sinalização ligadas à proliferação, à produção de citocinas e à reprogramação metabólica ao controlar programas transcricionais dependentes de Ca2+. A função do canal interage com vias que regulam a progressão do ciclo celular e respostas ao estresse, e alterações na atividade de KV1.3 têm sido associadas à desregulação imunológica e a mecanismos inflamatórios. No sistema nervoso, KV1.3 contribui para a excitabilidade e para dinâmicas de sinalização relevantes à neuroinflamação e à comunicação entre neurônios e glia.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO KV1.3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Kcna3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Kcna3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Kcna3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína KV1.3.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Kcna3 para a investigação da sinalização de KV1.3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Kcna3 críticos para a função KV1.3
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Kcna3 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo KV1.3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo KV1.3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Kcna3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo KV1.3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR KV1.3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Kcna3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Kcna3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.