KV1.1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403806

Descripción general

KCNA1 codifica la subunidad humana del canal de potasio dependiente de voltaje KV1.1, un componente formador de poro que contribuye a las corrientes de K+ rectificadoras tardías y determina la excitabilidad de la membrana. KV1.1 influye en la repolarización del potencial de acción, la frecuencia de disparo y la transmisión sináptica, vinculando la actividad del canal con la señalización neuronal y la estabilidad de las redes. A través de su control del potencial de membrana en reposo y de la entrada de Ca2+ dependiente de la excitabilidad, KV1.1 se conecta con vías que regulan la liberación de neurotransmisores y la expresión génica dependiente de la actividad. Las alteraciones genéticas y funcionales de KCNA1 se asocian con fenotipos neurológicos, incluyendo ataxia episódica y susceptibilidad a crisis, lo que lo convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de la biología de las canalopatías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KV1.1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNA1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNA1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNA1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KV1.1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNA1 para la investigación de la señalización de KV1.1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KCNA1 críticos para la función de KV1.1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNA1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KV1.1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KV1.1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNA1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KV1.1 (h) y el plásmido HDR KV1.1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNA1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNA1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.