Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ksr-1 (h): sc-401768

Présentation

KSR1 code le suppresseur de kinase de Ras 1 (Ksr-1), une protéine échafaudage qui organise les composants de la cascade RAF–MEK–ERK/MAPK afin de moduler l’amplitude, la durée et la localisation subcellulaire du signal. En coordonnant l’assemblage du module MAPK en aval des récepteurs à activité tyrosine kinase et de RAS, Ksr-1 contribue à la régulation des décisions de prolifération, de différenciation et de survie. L’activité et l’expression de KSR1 ont été associées à une modification de la sortie de la voie MAPK dans des contextes de signalisation oncogénique, et KSR1 a également été impliqué dans des réseaux de signalisation immunitaires et inflammatoires qui recoupent des programmes transcriptionnels dépendants d’ERK. Ces caractéristiques font de KSR1 un nœud utile pour disséquer l’architecture de la voie, le contrôle par rétroaction et la propagation contextuelle du signal dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ksr-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KSR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KSR1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KSR1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ksr-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KSR1 pour l'étude de la signalisation de Ksr-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KSR1 essentiels à la fonction de Ksr-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KSR1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ksr-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Ksr-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KSR1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ksr-1 plasmide HDR (h) et le Ksr-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KSR1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KSR1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.