KRTAP14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423901

Übersicht

Krtap14 kodiert das keratinassoziierte Protein 14, eine kleine, cysteinreiche strukturelle Komponente der Haarshaftmatrix der Maus, die zur mechanischen Festigkeit und zur Quervernetzung von Keratin-Intermediärfilamenten beiträgt. KRTAP14 ist an Programmen der terminalen Differenzierung von Keratinozyten im Haarfollikel beteiligt und in Prozesse der Haarfaserassemblierung, der Organisation von Cuticula und Cortex sowie der durch Disulfidbrücken vermittelten Stabilisierung eingebunden. Eine veränderte Expression oder strukturelle Variation keratinassoziierter Proteine steht mit Veränderungen der Haartextur und Phänotypen erhöhter Brüchigkeit in Zusammenhang, wodurch Krtap14 für Untersuchungen zur Integrität des Haarschafts und zur Follikelbiologie relevant ist. Seine Expression wird häufig im Zusammenhang mit Keratinisierungsnetzwerken und Signalwegen betrachtet, die mit dem epidermalen Differenzierungskomplex assoziiert sind und die Bildung von Hautanhangsgebilden prägen.

Das KRTAP14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Krtap14-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Krtap14-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Krtap14 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KRTAP14-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Krtap14-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KRTAP14-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Krtap14-Exone abzielen, die für die KRTAP14-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Krtap14-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KRTAP14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom KRTAP14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Krtap14-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KRTAP14 HDR-Plasmid (m) und KRTAP14 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Krtap14-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Krtap14-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.