Kremen-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403791

Übersicht

KREMEN1 kodiert Kremen‑1, einen Single‑Pass‑Transmembranrezeptor, der vor allem als hochaffiner Bindungspartner von Dickkopf‑(DKK‑)Proteinen bekannt ist und die kanonische Wnt/β‑Catenin‑Signalübertragung moduliert. Durch die Bildung von Komplexen mit LRP5/6 und DKK1 fördert Kremen‑1 die Internalisierung des Rezeptors und schwächt Wnt‑getriebene Transkriptionsprogramme ab, die Zellschicksalsentscheidungen, Proliferation und Gewebehomöostase steuern. Über diese Verknüpfung wurde KREMEN1 in Kontexten untersucht, in denen ein Ungleichgewicht des Wnt‑Signalwegs zu Entwicklungsphänotypen und zu krankheitsassoziierter Umprogrammierung von Signalwegen beiträgt, darunter Forschungsfelder mit Bezug zu Krebs und Knochen. Seine Membranlokalisation und die Rezeptor‑Ligand‑Interaktionen machen es zudem nützlich, Signalweg‑Crosstalk an der Zelloberfläche sowie die nachgeschaltete, β‑Catenin‑abhängige Genregulation zu analysieren.

Das Kremen-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KREMEN1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KREMEN1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KREMEN1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Kremen-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KREMEN1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Kremen-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KREMEN1-Exone abzielen, die für die Kremen-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KREMEN1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Kremen-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Kremen-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KREMEN1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Kremen-1 HDR-Plasmid (h) und Kremen-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KREMEN1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KREMEN1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.