KLHL9 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433908

Visão geral

Klhl9 codifica a proteína murina KLHL9, um adaptador de substratos da família BTB–BACK–Kelch que coopera com complexos de ligase E3 de ubiquitina CUL3-RBX1 para promover a ubiquitinação e a degradação, dependente do proteassoma, de proteínas cliente específicas. Por meio desse controle de proteostase mediado por ubiquitina, a KLHL9 contribui para a regulação do controle de qualidade proteica, de processos ligados ao ciclo celular e de saídas de sinalização que dependem da eliminação oportuna de substratos. A perturbação de adaptadores CUL3–KLHL é amplamente relevante para vias de ubiquitina desreguladas implicadas no neurodesenvolvimento, na biologia neuromuscular e na remodelação do proteoma associada ao câncer, tornando Klhl9 um nó útil para estudar a especificidade do sistema ubiquitina–proteassoma. Em modelos murinos, abordagens de perda de função permitem dissecar como a seleção de substratos dependente de KLHL9 molda fenótipos celulares a jusante em tecidos ou tipos celulares definidos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO KLHL9 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Klhl9 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Klhl9, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Klhl9 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína KLHL9.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Klhl9 para a investigação da sinalização de KLHL9, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Klhl9 críticos para a função KLHL9
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Klhl9 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo KLHL9 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo KLHL9 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Klhl9. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo KLHL9 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR KLHL9 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Klhl9 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Klhl9 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.