KLHL9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-433908

Übersicht

Klhl9 kodiert das Mausprotein KLHL9, einen Substratadapter der BTB–BACK–Kelch-Familie, der mit CUL3‑RBX1‑E3‑Ubiquitinligase-Komplexen kooperiert, um die Ubiquitinierung und den proteasomenabhängigen Abbau spezifischer Zielproteine zu fördern. Über diese ubiquitinvermittelte Kontrolle der Proteostase trägt KLHL9 zur Regulation der Proteinhomöostase, zellzyklusgekoppelter Prozesse und von Signaloutputs bei, die von einer rechtzeitigen Entfernung von Substraten abhängen. Störungen von CUL3–KLHL‑Adaptern sind allgemein relevant für fehlregulierte Ubiquitinwege, die an Neuroentwicklung, neuromuskulärer Biologie und krebsassoziiertem Proteom‑Remodeling beteiligt sind, wodurch Klhl9 einen nützlichen Knotenpunkt zur Untersuchung der Spezifität des Ubiquitin‑Proteasom‑Systems darstellt. In Mausmodellen ermöglichen Loss‑of‑Function‑Ansätze die Aufklärung, wie die KLHL9‑abhängige Substratauswahl nachgelagerte zelluläre Phänotypen in definierten Geweben oder Zelltypen prägt.

Das KLHL9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Klhl9-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Klhl9-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Klhl9 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KLHL9-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Klhl9-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KLHL9-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Klhl9-Exone abzielen, die für die KLHL9-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Klhl9-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KLHL9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom KLHL9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Klhl9-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KLHL9 HDR-Plasmid (m) und KLHL9 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Klhl9-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Klhl9-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.