KLF6 Double Nickase Plasmid (h): sc-400888-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das KLF6 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- KLF6 Double-Nickase-Plasmid (h) und KLF6 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KLF6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: KLF6: sc-365633
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
KLF6 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400888-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KLF6 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400888-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KLF6 (Krüppel-like factor 6) kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der an GC-reiche Promotorelemente bindet, um Gene zu regulieren, die den Zellzyklusfortschritt, die Differenzierung und Antworten auf zellulären Stress steuern. Es ist an Transkriptionsprogrammen beteiligt, die sich mit p53-abhängigen Checkpoints und TGF-β-assoziierter Signalübertragung überschneiden, und prägt so eine kontextabhängige Kontrolle von Proliferation und Apoptose. Veränderte KLF6-Aktivität oder -Expression wurde mit gestörter Wachstumsregulation und entzündungsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was es zu einem relevanten Knotenpunkt für die Untersuchung transkriptioneller Fehlregulation in der Biologie menschlicher Erkrankungen macht. In der biomedizinischen Forschung wird KLF6 häufig im Hinblick auf seine tumorunterdrückerähnlichen Funktionen, Gewebeumbauprozesse und die Stabilität genregulatorischer Netzwerke untersucht.
KLF6 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KLF6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KLF6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KLF6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KLF6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.