Plasmide Double Nickase (h) KIR6.1: sc-401477-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) KIR6.1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide KIR6.1 Double Nickase (h) et le plasmide KIR6.1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KCNJ8. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) KIR6.1 | sc-401477-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) KIR6.1 | sc-401477-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNJ8 code la sous-unité de canal potassique à rectification entrante KIR6.1, un composant central des canaux potassiques sensibles à l’ATP (KATP) qui couplent l’état métabolique cellulaire à l’excitabilité membranaire. En s’associant à des sous-unités de récepteur aux sulfonylurées, KIR6.1 contribue à la régulation du tonus du muscle lisse vasculaire et d’autres processus propres aux cellules excitables, via un contrôle d’ouverture/fermeture dépendant du rapport ATP/ADP et, en aval, la modulation de l’entrée de calcium et de la contractilité. Cette voie de détection métabolique influence les réponses à l’hypoxie, au stress ischémique et à la déplétion énergétique en modulant le potentiel de membrane et l’excitabilité. Les variations génétiques ou la dérégulation de KCNJ8 ont été associées à des phénotypes cardiovasculaires et liés à l’excitabilité, ce qui soutient sa pertinence pour des études mécanistiques de la biologie des canaux ioniques et de la signalisation bioénergétique.
KIR6.1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNJ8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNJ8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNJ8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNJ8.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.