KIR6.1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401477

Übersicht

KCNJ8 kodiert die inward-rectifier-Kaliumkanal-Untereinheit KIR6.1 (Kir6.1), eine zentrale Komponente ATP-sensitiver Kaliumkanäle (KATP), die den zellulären Stoffwechselzustand mit der Erregbarkeit der Zellmembran koppeln. In vielen Geweben bildet Kir6.1 zusammen mit Sulfonylharnstoffrezeptor‑Untereinheiten funktionelle Komplexe und reguliert den Kaliumfluss als Antwort auf Veränderungen des ATP/ADP-Verhältnisses. Dadurch beeinflusst es den Tonus der glatten Gefäßmuskulatur, zelluläre Stressantworten und erregbarkeitsabhängige Signalwege. Indem KIR6.1 die Nukleotiderkennung mit der Ionenleitfähigkeit verknüpft, trägt es zu Prozessen wie der Stabilisierung des Membranpotenzials, der Calciumhomöostase und der bioenergetischen Homöostase bei. Genetische und funktionelle Störungen von KCNJ8 wurden mit Kanalopathien und kardiovaskulären Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für mechanistische Studien in erregbaren Zellen und in Kontexten metabolischer Signalgebung unterstreicht.

Das KIR6.1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KCNJ8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KCNJ8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KCNJ8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KIR6.1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KCNJ8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KIR6.1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KCNJ8-Exone abzielen, die für die KIR6.1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KCNJ8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KIR6.1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KIR6.1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KCNJ8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KIR6.1 HDR-Plasmid (h) und KIR6.1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KCNJ8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KCNJ8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.