KIR3DL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406227

Übersicht

KIR3DL3 kodiert einen inhibitorischen, immunglobulinähnlichen Killerzellrezeptor, der auf Subpopulationen von NK-Zellen und T‑Zellen exprimiert wird und dort zur Immunüberwachung beiträgt, indem er Zytotoxizität sowie die Freisetzung von Zytokinen durch die ITIM‑abhängige Rekrutierung von Phosphatasen wie SHP‑1/2 dämpft. Durch die Modulation der Signalweiterleitung stromabwärts aktivierender Rezeptoren hilft KIR3DL3, das Gleichgewicht zwischen Immunaktivierung und Toleranz feinzujustieren, und beeinflusst damit Signalwege, die die Effektorfunktion von Lymphozyten und die Erkennung von Zielzellen steuern. Variationen im KIR‑Gengehalt und in der Expression werden häufig im Kontext HLA‑abhängiger Immuninteraktionen untersucht, mit Bedeutung für Tumorimmunologie, antivirale Antworten und die Transplantationsimmunbiologie. Eine fehlregulierte Signalgebung inhibitorischer Rezeptoren kann die immunologischen „Setpoints“ bei chronischen Infektionen, Autoimmunität und krebsassoziierter Immunflucht verändern, wodurch KIR3DL3 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zu checkpoint‑ähnlicher inhibitorischer Regulation in angeborenen und angeboren‑ähnlichen Lymphozyten darstellt.

Das KIR3DL3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KIR3DL3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KIR3DL3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KIR3DL3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KIR3DL3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KIR3DL3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KIR3DL3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KIR3DL3-Exone abzielen, die für die KIR3DL3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KIR3DL3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KIR3DL3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KIR3DL3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KIR3DL3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KIR3DL3 HDR-Plasmid (h) und KIR3DL3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KIR3DL3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KIR3DL3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.