KIR3.2 Double Nickase Plasmid (h): sc-405031-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das KIR3.2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- KIR3.2 Double-Nickase-Plasmid (h) und KIR3.2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KCNJ6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
KIR3.2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405031-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KIR3.2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405031-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNJ6 kodiert den menschlichen einwärtsgleichrichtenden Kaliumkanal KIR3.2 (GIRK2), einen G‑Protein‑gesteuerten Ionenkanal, der die GPCR-Signalübertragung mit einer Hyperpolarisierung der Membran und einer verminderten zellulären Erregbarkeit koppelt. KIR3.2 trägt zur Kaliumleitfähigkeit in Neuronen und anderem erregbarem Gewebe bei, integriert Neurotransmitter- und Neuromodulator-Signale über eine Gβγ-vermittelte Gate-Kontrolle und prägt dadurch Feuermuster, synaptische Transmission und Netzwerkaktivität. Der Kanal ist an Signalwegen beteiligt, die die Aktivierung von GPCRs mit Ionenhomöostase und elektrophysiologischer Steuerung verbinden, mit nachgeschalteten Effekten auf den Calciumeinstrom und aktivitätsabhängige Signalprozesse. Eine Fehlregulation oder genetische Variation in KCNJ6 wurde mit neurophysiologischen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Studien zu erregbarkeitsgetriebenen Krankheitsmechanismen unterstreicht.
KIR3.2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KCNJ6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KCNJ6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KCNJ6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KCNJ6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.