Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIF3A (m): sc-421275
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- KIF3A Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique KIF3A, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: KIF3A Antibody (E-5): sc-376680
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIF3A (m) | sc-421275 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Kif3a code pour le membre de la famille des kinésines KIF3A, une sous-unité motrice centrale du complexe hétérotrimérique kinésine-2, qui assure le transport intraflagellaire antérograde le long des microtubules. KIF3A est indispensable à l’assemblage et au maintien du cil primaire, permettant une transduction de signaux dépendante des cils, notamment l’activité de la voie Hedgehog, ainsi que des processus plus larges de trafic ciliaire influençant les décisions de destinée cellulaire. Dans les modèles murins, la fonction de Kif3a est étroitement liée à la morphogenèse tissulaire et à des programmes de signalisation homéostatiques qui reposent sur des cils intacts, ce qui associe sa perturbation à des phénotypes pertinents pour les ciliopathies. Ainsi, KIF3A est fréquemment utilisé pour analyser comment le transport basé sur les microtubules s’articule avec la signalisation du développement et la régulation, médiée par le cil, de la prolifération et de la différenciation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KIF3A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Kif3a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Kif3a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Kif3a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KIF3A.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Kif3a pour l'étude de la signalisation de KIF3A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Kif3a essentiels à la fonction de KIF3A
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Kif3a pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le KIF3A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le KIF3A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Kif3a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le KIF3A plasmide HDR (m) et le KIF3A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Kif3a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Kif3a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.