Plásmido Doble Nickase (h) Ki67: sc-400081-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Ki67 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Ki67 (h) y el plásmido de doble nickasa Ki67 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a MKI67. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Ki67 Anticuerpo (Ki-67): sc-23900
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Ki67 | sc-400081-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Ki67 | sc-400081-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MKI67 codifica Ki67, una proteína nuclear asociada a la cromatina ampliamente utilizada como marcador de ciclo celular activo, cuya expresión alcanza un máximo durante S/G2/M y está ausente en células quiescentes en G0. Ki67 contribuye a la organización de orden superior de los cromosomas y favorece la formación de la periferia cromosómica mitótica, ayudando a mantener la segregación cromosómica adecuada y la dinámica de la división celular. Por su estrecha relación con los programas de proliferación, Ki67 se integra en redes reguladoras del ciclo celular y se emplea con frecuencia para estudiar el control del crecimiento y las respuestas al estrés replicativo. La desregulación de la expresión de MKI67 se asocia comúnmente con estados de hiperproliferación en diversos tipos de tumores, lo que respalda su valor en estudios mecanísticos del control del ciclo celular y de la biología del cáncer.
Ki67 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MKI67 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MKI67. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MKI67. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MKI67 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.