Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ki67 (m): sc-421656

Présentation

Mki67 code la protéine marqueur de prolifération Ki67, un facteur nucléaire étroitement lié à la progression du cycle cellulaire et largement exprimé dans les cellules en division active, mais absent en quiescence. Ki67 s’associe à la chromatine et à la périphérie des chromosomes mitotiques, soutenant l’organisation des chromosomes et contribuant au bon déroulement de la mitose ainsi qu’à la structure du nucléole pendant l’interphase. Son expression s’intègre aux programmes centraux de contrôle du cycle cellulaire, notamment les voies qui régissent la réplication de l’ADN, la mitose et la régulation des points de contrôle, ce qui en fait un outil largement utilisé pour quantifier les états prolifératifs dans les tissus et les cellules en culture. Des niveaux dérégulés de Ki67 sont fréquemment corrélés à des phénotypes hyperprolifératifs et sont exploités dans des études de biologie tumorale, de régénération tissulaire et d’expansion des cellules immunitaires dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ki67 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mki67 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mki67, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mki67 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ki67.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mki67 pour l'étude de la signalisation de Ki67, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mki67 essentiels à la fonction de Ki67
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mki67 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ki67 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Ki67 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mki67. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ki67 plasmide HDR (m) et le Ki67 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mki67 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mki67 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.