Ketohexokinase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421261

Übersicht

Khk kodiert die Ketohexokinase (Fruktokinase), ein Schlüsselenzym, das die Phosphorylierung von Fruktose zu Fruktose-1-phosphat katalysiert und damit Fruktose fest in nachgeschaltete Kohlenstoffflüsse einspeist. In Mausgeweben mit hoher Kapazität zur Fruktoseverwertung ist diese Aktivität mit Glykolyse, Glukoneogenese sowie dem weiteren Kohlenhydrat- und Energiestoffwechsel verknüpft – unter anderem über die Regulation von Triosephosphat‑Intermediaten und hepatische metabolische Signalwege. Eine veränderte, KHK‑abhängige Fruktoseverstoffwechselung wurde mit Phänotypen metabolischen Stresses in Verbindung gebracht, darunter eine gestörte Lipidakkumulation und Insulinsignalisierung, wodurch Khk einen geeigneten Ansatzpunkt für Untersuchungen zur Nährstoffsensorik und zum metabolischen Remodeling darstellt. Als Bestandteil fruktoseantwortender Signalwege kann eine Störung der Ketohexokinase das Redoxgleichgewicht, den ATP‑Verbrauch und Transkriptionsprogramme beeinflussen, die die Lipid- und Glukosehomöostase steuern.

Das Ketohexokinase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Khk-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Khk-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Khk nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ketohexokinase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Khk-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ketohexokinase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Khk-Exone abzielen, die für die Ketohexokinase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Khk-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ketohexokinase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Ketohexokinase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Khk-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ketohexokinase HDR-Plasmid (m) und Ketohexokinase HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Khk-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Khk-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.