Keratin 6B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421355

Übersicht

Krt6b kodiert Keratin 6B, ein Typ-II-Intermediärfilamentprotein, das sich mit Typ-I-Keratinen paart, um das Zytoskelettnetzwerk mehrschichtiger Epithelien aufzubauen. Keratin 6B unterstützt die mechanische Belastbarkeit, das epitheliale Remodeling sowie stressinduzierte Programme, die mit Wundheilung und hyperproliferativen Zuständen einhergehen, und wirkt dabei mit Prozessen der Differenzierung und der zytoskelettalen Organisation zusammen. In der Maushaut und verwandten Hautanhangsgebilden wird die Krt6b-Expression bei Verletzung und Entzündung induziert und verknüpft so die Dynamik der Keratinfilamente mit Barrierefunktion und Gewebehomöostase. Eine Dysregulation von Keratinnetzwerken ist mit epithelialer Fragilität und aberranten Verhornungsphänotypen assoziiert, wodurch Krt6b einen hilfreichen Ansatzpunkt zur Untersuchung keratinabhängiger Stressantworten darstellt.

Das Keratin 6B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Krt6b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Krt6b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Krt6b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Keratin 6B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Krt6b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Keratin 6B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Krt6b-Exone abzielen, die für die Keratin 6B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Krt6b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Keratin 6B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Keratin 6B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Krt6b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Keratin 6B HDR-Plasmid (m) und Keratin 6B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Krt6b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Krt6b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.