Keratin 32 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410857

Übersicht

KRT32 kodiert Keratin 32, ein Typ‑I‑Haarkeratin, das mit Typ‑II‑Keratinen polymerisiert und so Intermediärfilamente bildet, die für die strukturelle Integrität und mechanische Widerstandsfähigkeit von Haarfasern essenziell sind. Als Bestandteil des Keratin-Zytoskeletts trägt KRT32 zur Organisation des Zytoskeletts, zu epithelialen Differenzierungsprogrammen in Haarfollikel-Linien und zur Assemblierung keratinisierter Strukturen bei. Eine veränderte Expression oder Störung von Haarkeratin-Netzwerken ist mit Phänotypen einer brüchigen Haarfaser verbunden und liefert einen gut nutzbaren Readout zur Untersuchung der Dynamik der Keratinfilament-Assemblierung. KRT32 ist daher relevant für die Erforschung zytoskelettaler Stressantworten, des Keratinfilament-Umsatzes sowie von Genotyp‑Phänotyp‑Zusammenhängen in der Haarbiologie und in Keratinisierungsprozessen.

Das Keratin 32 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KRT32-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KRT32-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KRT32 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Keratin 32-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KRT32-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Keratin 32-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KRT32-Exone abzielen, die für die Keratin 32-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KRT32-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Keratin 32 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Keratin 32 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KRT32-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Keratin 32 HDR-Plasmid (h) und Keratin 32 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KRT32-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KRT32-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.