Keratin 2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402077-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Keratin 2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Keratin 2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Keratin 2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KRT2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Keratin 2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402077-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Keratin 2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402077-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT2 kodiert Keratin 2, ein Intermediärfilamentprotein vom Typ II, das überwiegend in suprabasal gelegenen Keratinozyten exprimiert wird, wo es mit Keratinen vom Typ I zu Heterodimeren zusammentritt und so das zytoskelettale Netzwerk der Epidermis bildet. Keratin 2 trägt zur mechanischen Belastbarkeit, zur Zell-Zell-Kohäsion und zur korrekten Differenzierung während der epidermalen Schichtung bei, indem es in desmosomenassoziierte Zellkontaktkomplexe eingebunden ist und am stressabhängigen Remodeling der Intermediärfilamente mitwirkt. Eine veränderte KRT2-Funktion stört die Filamentorganisation und die Integrität der Epidermis; pathogene Varianten sind mit Verhornungsstörungen einschließlich der oberflächlichen epidermolytischen Ichthyose assoziiert. Da die Dynamik von Keratinfilamenten mit Signalwegen verknüpft ist, die die Barrierebildung, die Kornifikation und Reaktionen auf mechanischen oder entzündlichen Stress steuern, ist KRT2 ein nützliches Ziel zur Untersuchung der Haut-Homöostase und der zytoskelettalen Regulation.
Keratin 2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KRT2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KRT2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KRT2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KRT2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.