KDEL receptor 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-426938

Übersicht

Kdelr1 kodiert den KDEL-Rezeptor 1, einen Sortierrezeptor mit sieben Transmembrandomänen, der C‑terminale, KDEL-ähnliche Rückholmotive auf löslichen, im ER ansässigen Proteinen erkennt und deren retrograden Transport vom Golgi zum ER vermittelt. Durch pH-abhängiges Pendeln zwischen ER und Golgi trägt der KDEL-Rezeptor 1 zur Aufrechterhaltung der Proteostase im ER bei, unterstützt eine angemessene Faltungskapazität und bewahrt die Funktionsfähigkeit des sekretorischen Weges. Störungen des ER–Golgi-Transports und der ER-Qualitätskontrolle können Signalkaskaden der Unfolded-Protein-Response (UPR) sowie eine veränderte Sekretion auslösen – Prozesse, die in experimentellen Systemen breit mit Stressanfälligkeit und degenerationsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht werden. In Mausmodellen ist eine Beeinträchtigung von Kdelr1 daher relevant, um die Homöostase des sekretorischen Weges und zelluläre Stressantworten in Immun-, neuronalen und metabolisch aktiven Geweben zu untersuchen.

Das KDEL receptor 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Kdelr1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Kdelr1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Kdelr1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KDEL receptor 1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Kdelr1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KDEL receptor 1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Kdelr1-Exone abzielen, die für die KDEL receptor 1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Kdelr1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KDEL receptor 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom KDEL receptor 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Kdelr1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KDEL receptor 1 HDR-Plasmid (m) und KDEL receptor 1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Kdelr1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Kdelr1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.