Plasmide CRISPR d'Activation (h) KDEL receptor 1: sc-402751-ACT

Le gène humain **KDELR1** code le récepteur KDEL 1, un récepteur de récupération résidant dans l’appareil de Golgi qui reconnaît les motifs de type KDEL en C‑terminal des chaperons solubles du réticulum endoplasmique (RE) et assure leur transport rétrograde du Golgi vers le RE via des vésicules à manteau COPI. En maintenant la protéostasie du RE et en soutenant la voie sécrétoire, KDELR1 influence la signalisation du stress du RE, la dynamique de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) et le contrôle qualité des protéines naissantes. La perturbation du trafic RE–Golgi et du recyclage des chaperons est largement pertinente pour des affections caractérisées par une dysfonction de la sécrétion et un stress protéotoxique, notamment en cancérologie, dans les maladies neurodégénératives et les états inflammatoires. KDELR1 constitue donc un nœud utile pour étudier comment l’homéostasie du trafic façonne les sorties de signalisation et la fitness cellulaire en situation de stress.

KDEL receptor 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KDELR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

KDEL receptor 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KDELR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KDELR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de KDEL receptor 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KDELR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de KDEL receptor 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie KDEL receptor 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de KDELR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.