KDEL receptor 1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402751-ACT

Das humane KDELR1 kodiert den KDEL-Rezeptor 1, einen im Golgi-Apparat lokalisierten Rückholrezeptor, der C‑terminale KDEL‑ähnliche Motive löslicher ER‑Chaperone erkennt und deren retrograden Transport vom Golgi zurück in das endoplasmatische Retikulum über COPI‑beschichtete Vesikel vermittelt. Durch die Aufrechterhaltung der ER‑Proteostase und die Unterstützung des sekretorischen Weges beeinflusst KDELR1 die ER‑Stress-Signalgebung, die Dynamik der Unfolded-Protein-Response (UPR) sowie die Qualitätskontrolle neu synthetisierter Proteine. Störungen des ER‑Golgi‑Transports und des Chaperon‑Recyclings sind in vielen Zuständen relevant, die durch sekretorische Dysfunktion und proteotoxischen Stress gekennzeichnet sind, darunter Krebsbiologie, Neurodegeneration und entzündliche Zustände. KDELR1 dient daher als nützlicher Knotenpunkt, um zu untersuchen, wie Homöostase im Membrantransport Signaloutputs und die zelluläre Fitness unter Stress prägt.

KDEL receptor 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KDELR1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

KDEL receptor 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KDELR1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KDELR1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen KDEL receptor 1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KDELR1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von KDEL receptor 1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des KDEL receptor 1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KDELR1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.