KCTD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406758

Übersicht

KCTD1 (Kaliumkanal-Tetramerisierungsdomäne enthaltend 1) kodiert ein Protein mit BTB/POZ-Domäne, das an Protein-Protein-Interaktionsnetzwerken beteiligt ist, welche die Transkriptionskontrolle und Programme der zellulären Differenzierung beeinflussen. Mitglieder der KCTD-Familie fungieren häufig als Adapterproteine in Cullin3-(CUL3)-basierten E3-Ubiquitin-Ligase-Komplexen, indem sie spezifische Substrate mit dem ubiquitinvermittelten Abbau verknüpfen und so Signalausgänge mitprägen. Über diese regulatorischen Funktionen wird KCTD1 mit Entwicklungsprozessen und der Aufrechterhaltung der Zellidentität in Verbindung gebracht; genetische Störungen sind mit angeborenen Erkrankungen assoziiert, die ektodermale Gewebe betreffen. In der biomedizinischen Forschung wird KCTD1 im Zusammenhang mit der Modulation von Signalwegen, Proteostase sowie genregulatorischen Schaltkreisen untersucht, die für Krankheitsphänotypen relevant sind.

Das KCTD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KCTD1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KCTD1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KCTD1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KCTD1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KCTD1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KCTD1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KCTD1-Exone abzielen, die für die KCTD1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KCTD1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KCTD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KCTD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KCTD1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KCTD1 HDR-Plasmid (h) und KCTD1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KCTD1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KCTD1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.