KCNQ4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403090-ACT

KCNQ4 codifica uma subunidade de um canal de potássio dependente de voltagem que contribui para as correntes de K+ do tipo M e ajuda a estabelecer o potencial de membrana em repouso e a excitabilidade celular. Ao regular a repolarização da membrana e a homeostase de íons potássio, KCNQ4 influencia a sinalização eletrofisiológica em tecidos excitáveis, incluindo epitélios sensoriais. A atividade desregulada de KCNQ4 tem sido associada à disfunção auditiva e a fenótipos de perda auditiva neurossensorial progressiva, tornando-o relevante para estudos da fisiologia das células ciliadas cocleares e de respostas ao estresse dependentes de canais iônicos. KCNQ4 também é usado como um ponto de entrada mecanístico para investigar programas de sinalização associados a canalopatias e adaptações transcricionais a alterações na condutância de K+.

KCNQ4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KCNQ4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KCNQ4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KCNQ4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KCNQ4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KCNQ4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KCNQ4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KCNQ4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KCNQ4 em células tumorais com expressão de KCNQ4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.