Plásmido Doble Nickase (h) karyopherin β3: sc-402071-NIC

IPO5 codifica la carioferina β3 (importina-5), un receptor de transporte nuclear que reconoce señales específicas de localización nuclear y media la importación dependiente de la GTPasa Ran de cargas proteicas a través del complejo del poro nuclear. Al controlar el tráfico nucleo-citoplasmático, IPO5 ayuda a regular programas transcripcionales, la progresión del ciclo celular y vías de señalización asociadas a la diferenciación mediante la regulación espacial de factores de transcripción y proteínas de unión a ARN. La actividad alterada de las importinas y el transporte nuclear desregulado son características recurrentes en el cáncer y otros trastornos proliferativos, y IPO5 se ha vinculado a señales de crecimiento aberrantes por la localización incorrecta de proteínas reguladoras. Como resultado, IPO5 se estudia con frecuencia en el contexto de la remodelación de las vías de transporte nuclear, las respuestas al estrés y las dependencias a escala genómica en células transformadas.

karyopherin β3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IPO5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IPO5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IPO5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IPO5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.