Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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karyopherin β3 Double Nickase Plasmid (h): sc-402071-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das karyopherin β3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- karyopherin β3 Double-Nickase-Plasmid (h) und karyopherin β3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IPO5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: karyopherin β3: sc-55527
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
karyopherin β3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402071-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
karyopherin β3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402071-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IPO5 kodiert Karyopherin β3 (Importin-5), einen nukleären Transportrezeptor, der spezifische Kernlokalisationssignale erkennt und den Ran-GTPase-abhängigen Import von Protein-Cargos durch den Kernporenkomplex vermittelt. Durch die Kontrolle des nukleozytoplasmatischen Traffickings trägt IPO5 zur Regulation von Transkriptionsprogrammen, der Zellzyklusprogression und differenzierungsassoziierten Signalwegen bei, indem es die räumliche Verteilung von Transkriptionsfaktoren und RNA-bindenden Proteinen steuert. Veränderte Importin-Aktivität und eine dysregulierte Kerntransportmaschinerie sind wiederkehrende Merkmale bei Krebs und anderen proliferativen Erkrankungen, und IPO5 wurde mit aberranter Wachstumssignalgebung durch Fehl-Lokalisierung regulatorischer Proteine in Verbindung gebracht. Daher wird IPO5 häufig im Kontext der Umgestaltung von Kerntransportwegen, von Stressantworten und genomeweiten Abhängigkeiten in transformierten Zellen untersucht.
karyopherin β3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IPO5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IPO5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IPO5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IPO5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.