Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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karyopherin α1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402324-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das karyopherin α1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- karyopherin α1 Double-Nickase-Plasmid (h) und karyopherin α1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KPNA1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: karyopherin α1: sc-101292
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
karyopherin α1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402324-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
karyopherin α1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402324-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KPNA1 kodiert Karyopherin Alpha 1 (Importin-α5), einen Adapter der klassischen nukleären Importmaschinerie. Er erkennt basische nukleäre Lokalisationssignale (NLS) auf Frachtproteinen und koppelt sie an Importin-β, wodurch ein Ran-GTPase-abhängiger Transport durch den Kernporenkomplex ermöglicht wird. Durch die Kontrolle des nukleozytoplasmatischen Transports beeinflusst KPNA1 die Zellzyklusprogression, die DNA-Schadenssignalgebung, angeborene immunologische Transkriptionsantworten sowie stressadaptive Programme – vermittelt über den regulierten Kernzutritt von Transkriptionsfaktoren und regulatorischen Enzymen. Veränderte, importinvermittelte Transportprozesse wurden mit fehlregulierten Signalnetzwerken und der Umgestaltung von Genexpressionszuständen in Krebs sowie in neurodegenerativen und entzündlichen Kontexten in Verbindung gebracht. KPNA1 wird außerdem in der Wirt–Pathogen-Interaktion untersucht, da der nukleäre Import viraler oder bakterieller Effektoren Replikation und Mechanismen der Immunflucht beeinflussen kann.
karyopherin α1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KPNA1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KPNA1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KPNA1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KPNA1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.