Plasmide Double Nickase (h) Josephin-3: sc-418165-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Josephin-3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Josephin-3 Double Nickase (h) et le plasmide Josephin-3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TAF1D. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Josephin-3 Antibody (G-12): sc-514821
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Josephin-3 | sc-418165-NIC | 20 µg | $410.00 |
TAF1D code un facteur associé à une sous-unité de TFIID, impliqué dans la transcription par l’ARN polymérase I et la biogenèse ribosomale nucléolaire, reliant la synthèse du pré‑ARNr au contrôle de la croissance cellulaire et à la protéostasie. En coordonnant la fonction du promoteur de l’ADNr et le traitement du pré‑ARNr, TAF1D soutient la capacité proliférative et le remodelage du nucléole en réponse au stress. La perturbation des programmes transcriptionnels dépendants de Pol I est largement pertinente pour la régulation du cycle cellulaire, l’adaptation métabolique et les réponses au stress protéotoxique, souvent altérées dans le cancer et d’autres troubles du contrôle de la croissance. Bien que « Josephin‑3 » soit un nom de protéine plus couramment associé à des enzymes déubiquitinantes, ce produit est spécifié pour le locus humain TAF1D et convient pour étudier les phénotypes nucléolaires et transcriptionnels résultant d’une perturbation de TAF1D.
Josephin-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TAF1D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TAF1D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TAF1D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TAF1D.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.