JMJD3 Double Nickase Plasmid (m): sc-432132-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das JMJD3 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- JMJD3 Double-Nickase-Plasmid (m) und JMJD3 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Kdm6b abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
JMJD3 Double Nickase Plasmid (m) | sc-432132-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
JMJD3 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-432132-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Kdm6b** kodiert **JMJD3 (KDM6B)**, eine Histon-Demethylase mit Jumonji‑C‑Domäne, die repressive **H3K27me3**-Markierungen entfernt und dadurch die Transkriptionsaktivierung fördert. JMJD3 koordiniert die Chromatin-Remodellierung während der Linienfestlegung und in entzündlichen Signalwegen und beeinflusst Programme nachgeschalteter Signalwege wie **NF‑κB** sowie entwicklungsbiologische Transkriptionsnetzwerke. Durch die Regulation der Zugänglichkeit von Enhancern und Promotoren trägt es zur Polarisierung von Makrophagen, zur neuronalen und skelettalen Differenzierung sowie zur Genexpression im Zusammenhang mit zellulärer Seneszenz bei. Eine fehlregulierte Kdm6b/JMJD3-Aktivität wurde mit veränderten epigenetischen Zuständen in der Krebsbiologie, in neuroentwicklungsbezogenen Prozessen und in Modellen immunvermittelter Erkrankungen in Verbindung gebracht.
JMJD3 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Kdm6b-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Kdm6b abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Kdm6b-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Kdm6b-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.