Plasmide CRISPR d'Activation (h) JMJD2D: sc-404743-ACT

Le gène humain **KDM4D** code la déméthylase de lysine des histones **JMJD2D**, une enzyme à domaine **Jumonji C (JmjC)** qui enlève des marques méthyles répressives sur l’histone H3, en particulier **H3K9me3/me2**. En remodelant l’accessibilité de la chromatine, JMJD2D influence des programmes transcriptionnels liés aux réponses aux dommages de l’ADN, au contrôle du cycle cellulaire et à la régulation de gènes spécifiques de lignée. L’activité de KDM4D s’inscrit à l’interface de réseaux épigénétiques et de signalisation qui gouvernent la stabilité du génome et la plasticité transcriptionnelle, des processus fréquemment perturbés dans le cancer et d’autres maladies caractérisées par des états de chromatine dérégulés. En tant que facteur de modification de la chromatine, JMJD2D est largement étudiée pour son rôle dans la modulation de l’activité des enhancers et des promoteurs, et dans la coordination d’une expression génique dépendante du contexte.

JMJD2D Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KDM4D sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

JMJD2D Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KDM4D dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KDM4D, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de JMJD2D. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KDM4D natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de JMJD2D au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie JMJD2D dans les cellules tumorales présentant une expression de KDM4D silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.