JMJD2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432966

Übersicht

Kdm4a kodiert die murine Histon-Lysin-Demethylase JMJD2A (KDM4A), ein Enzym mit JmjC-Domäne, das repressive und aktivierende Methylmarkierungen an H3K9 und H3K36 entfernt und so die Chromatinzugänglichkeit sowie Transkriptionsprogramme mitgestaltet. Indem JMJD2A den epigenetischen Zustand mit DNA-abhängigen Prozessen koppelt, beeinflusst es die Zellzyklusprogression, Antworten auf Replikationsstress und die Genomstabilität und ist zudem in Signalwege eingebunden, die Differenzierung und hormonresponsive Transkription regulieren. Eine dysregulierte Aktivität der KDM4-Familie wird mit veränderter onkogener Signalgebung, defekter DNA-Reparatur und aberranter entwicklungsbezogener Genexpression in Verbindung gebracht, wodurch Kdm4a ein häufiges Ziel in Studien zu chromatingetriebenen Krankheitsmechanismen ist. In murinen Systemen wird die Perturbation von Kdm4a häufig eingesetzt, um zu untersuchen, wie die Dynamik der Histonmethylierung Transkriptionsnetzwerke und zelluläre Plastizität koordiniert.

Das JMJD2A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Kdm4a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Kdm4a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Kdm4a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die JMJD2A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Kdm4a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der JMJD2A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Kdm4a-Exone abzielen, die für die JMJD2A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Kdm4a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom JMJD2A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom JMJD2A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Kdm4a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das JMJD2A HDR-Plasmid (m) und JMJD2A HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Kdm4a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Kdm4a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.