Plasmide Double Nickase (h) JAK3: sc-400835-NIC

La janus kinase 3 (JAK3) est une tyrosine kinase non réceptrice principalement exprimée dans les lignées hématopoïétiques, qui couple la signalisation des récepteurs aux cytokines à des programmes transcriptionnels en aval. En s’associant à la chaîne γ commune (IL2RG) au niveau des récepteurs de l’IL‑2, de l’IL‑4, de l’IL‑7, de l’IL‑9, de l’IL‑15 et de l’IL‑21, JAK3 phosphoryle des sous-unités du récepteur et active les facteurs STAT afin de coordonner le développement, la prolifération et la différenciation des lymphocytes. Cette voie croise des réseaux plus larges de régulation immunitaire, notamment les signalisations PI3K–AKT et MAPK, façonnant la fonction effectrice et l’homéostasie. Une signalisation JAK3 dérégulée et certaines variations génétiques sont associées à des phénotypes d’immunodéficience et à une activation immunitaire aberrante, faisant de JAK3 un nœud clé pour les études mécanistiques en immunologie et en inflammation.

JAK3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus JAK3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de JAK3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de JAK3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de JAK3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.