Plásmido CRISPR de Activación (h) JAK2: sc-400246-ACT

El gen humano **JAK2** codifica una tirosina cinasa no receptora que acopla los receptores de citocinas a la señalización intracelular, transmitiendo señales desde receptores como **EPO-R**, **TPO-R/MPL** y los receptores de interferón. Tras su activación, JAK2 fosforila factores de transcripción **STAT** y coordina la comunicación cruzada con las vías **MAPK/ERK** y **PI3K–AKT** para regular la proliferación, la diferenciación y la supervivencia en linajes hematopoyéticos e inmunitarios. La señalización desregulada de JAK2 está fuertemente implicada en las neoplasias mieloproliferativas y otras neoplasias hematológicas, y la actividad alterada de la vía también contribuye a estados de señalización inflamatoria. Como nodo central en programas transcripcionales impulsados por citocinas, JAK2 se estudia ampliamente para comprender los mecanismos de transducción de señales, el compromiso de linaje y la señalización oncogénica dependiente del contexto.

JAK2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de JAK2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

JAK2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus JAK2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional JAK2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de JAK2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo JAK2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de JAK2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía JAK2 en células tumorales con expresión de JAK2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.