Jagged2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401322-ACT

Das humane **JAG2**-Gen kodiert **Jagged2**, einen membrangebundenen Liganden für **NOTCH**-Rezeptoren, der juxtakrines Signaling vermittelt, um Zellschicksalsentscheidungen, Linienfestlegung und Gewebemusterbildung zu regulieren. Eine durch Jagged2 ausgelöste Notch-Aktivierung beeinflusst transkriptionelle Programme, die Proliferation, Differenzierung und Apoptose steuern, und ist eng mit der Aufrechterhaltung von Stamm-/Vorläuferzellen sowie mit Entwicklungsprozessen verknüpft. Eine fehlregulierte JAG2/Notch-Signalgebung wurde mit veränderten epithelialen und hämatopoetischen Differenzierungszuständen in Verbindung gebracht und in Kontexten wie onkogener Signalgebung, Immunmodulation und Entwicklungsstörungen untersucht. Als Knotenpunkt des Signalwegs wird Jagged2 häufig genutzt, um Notch-abhängiges Crosstalk mit Wnt-, TGF-β- und inflammatorischen Signalnetzwerken zu untersuchen.

Jagged2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen JAG2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Jagged2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des JAG2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der JAG2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Jagged2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native JAG2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Jagged2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Jagged2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem JAG2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.