Jagged1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421197

Descripción general

Jag1 codifica el ligando de membrana Jagged1, un activador canónico de los receptores Notch que regula la señalización yuxtacrina que controla decisiones de destino celular, la formación de límites y el patrón tisular en el ratón. La interacción Jagged1–Notch desencadena la liberación proteolítica del dominio intracelular de Notch y una reprogramación transcripcional mediada por complejos RBPJ/CSL, modulando procesos como la angiogénesis, el mantenimiento de células madre y progenitoras y las interacciones epitelio–mesénquima. En modelos de desarrollo y de enfermedad, las alteraciones de la señalización Jag1/Notch se asocian con una diferenciación desregulada, un remodelado vascular aberrante y cambios en el comportamiento de células inmunes y del estroma. Dado que la salida de Notch depende en gran medida del contexto, la pérdida de función de Jag1 ofrece una forma directa de analizar en vivo y en células cultivadas los umbrales de señalización específicos del ligando y la intercomunicación con otras vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Jagged1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Jag1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Jag1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Jag1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Jagged1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Jag1 para la investigación de la señalización de Jagged1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Jag1 críticos para la función de Jagged1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Jag1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Jagged1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Jagged1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Jag1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Jagged1 (m) y el plásmido HDR Jagged1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Jag1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Jag1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.