Plásmido CRISPR de Activación (m) Jagged1: sc-421197-ACT

El gen Jag1 de ratón codifica Jagged1, un ligando canónico unido a la membrana para los receptores NOTCH que controla la señalización yuxtacrina durante el desarrollo embrionario y la homeostasis de los tejidos adultos. La interacción Jagged1–NOTCH regula la activación proteolítica del receptor y los programas transcripcionales posteriores que implican factores HES/HEY, los cuales influyen en la especificación del destino celular, la formación de límites y las decisiones de diferenciación en múltiples linajes. En el ratón, Jag1 contribuye a la remodelación vascular, la neurogénesis y las interacciones de células inmunitarias, y su desregulación se utiliza ampliamente para modelar alteraciones de la actividad de la vía Notch en anomalías del desarrollo y en contextos de señalización oncogénica o fibrótica. Dado que Jagged1 actúa en la superficie celular, también es relevante para estudios de la dinámica ligando–receptor, la activación de Notch dependiente de endocitosis y el control de los estados de progenitores mediado por el nicho.

Jagged1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Jag1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Jagged1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Jag1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Jag1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Jagged1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Jag1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Jagged1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Jagged1 en células tumorales con expresión de Jag1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.