Partículas Lentivirales de Activación (m) JAB1: sc-424107-LAC

Mouse Cops5 codifica JAB1 (también conocido como CSN5), la subunidad catalítica del signalosoma COP9, que controla el recambio proteico al regular las ligasas de ubiquitina cullin-RING mediante desnedilación. Al ajustar la degradación dependiente de ubiquitina, JAB1 influye en la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y los programas transcripcionales de adaptación al estrés, incluida la modulación de la actividad de AP-1 y de vías vinculadas a la estabilidad de inhibidores de CDK. JAB1 también interactúa con procesos de señalización y de transporte núcleo-citoplasma que afectan la proliferación y la diferenciación, lo que lo hace relevante para modelos de crecimiento desregulado y de remodelado tisular asociado a la inflamación. La actividad alterada de CSN5/JAB1 se ha asociado con la reconfiguración de vías oncogénicas y cambios en la señalización inmunitaria, lo que respalda su utilidad en estudios mecanísticos de proteostasis y de comunicación cruzada entre vías de señalización.

Las partículas de activación lentiviral JAB1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Cops5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral JAB1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Cops5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de JAB1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Cops5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.