Plasmide Double Nickase (h) JAB1: sc-401302-NIC

COPS5 code pour JAB1 (CSN5), la sous-unité catalytique du signalosome COP9, qui régule les ligases ubiquitine culline‑RING via la déneddylation, modelant ainsi le renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine. En modulant la stabilité et l’activité de régulateurs clés du cycle cellulaire et de la réponse au stress, JAB1 influence les réponses aux dommages de l’ADN, la transduction du signal et des programmes transcriptionnels liés à la prolifération et à la différenciation. JAB1 interagit également avec des voies telles que la signalisation AP‑1 et des réseaux de protéostase qui coordonnent l’adaptation cellulaire aux signaux environnementaux. Une activité dérégulée de COPS5/JAB1 a été associée à un contrôle de la croissance altéré et à des phénotypes oncogéniques, ce qui en fait une cible fréquente des études mécanistiques portant sur des voies de signalisation pertinentes en cancérologie et sur la dégradation des protéines.

JAB1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COPS5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COPS5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COPS5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COPS5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.