ITM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405155

Übersicht

Humanes STT3A kodiert die katalytische Untereinheit des Oligosaccharyltransferase(OST)-Komplexes, der die kotranslationale N‑verknüpfte Glykosylierung im endoplasmatischen Retikulum vermittelt. Durch die Übertragung vorassemblierter Oligosaccharide auf Asparaginreste in entstehenden Polypeptiden unterstützt STT3A Proteinfaltung, Qualitätskontrolle und Transport und beeinflusst den ER‑assoziierten Abbau sowie die Proteostase. Störungen der STT3A‑abhängigen Glykosylierung können die Reifung von Membran- und sekretorischen Proteinen beeinträchtigen, Rezeptor- und Immun-Signalwege verändern und die Unfolded-Protein-Response aktivieren. Fehlregulierte N‑Glykosylierungswege wurden mit kongenitalen Glykosylierungsstörungen in Verbindung gebracht und sind häufig in Krebs und anderen Erkrankungen umgebaut, die durch ER‑Stress und veränderte Glycoproteome an der Zelloberfläche gekennzeichnet sind.

Das ITM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des STT3A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des STT3A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von STT3A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ITM1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von STT3A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ITM1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf STT3A-Exone abzielen, die für die ITM1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere STT3A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ITM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ITM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des STT3A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ITM1 HDR-Plasmid (h) und ITM1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von STT3A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten STT3A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.