ITI-H5 Double Nickase Plasmid (h): sc-408967-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ITI-H5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ITI-H5 Double-Nickase-Plasmid (h) und ITI-H5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ITIH5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ITI-H5: sc-390885
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ITI-H5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408967-NIC | 20 µg | $410.00 |
Inter-Alpha-Trypsin-Inhibitor-Schwerkette 5 (ITIH5) ist ein sezerniertes, mit der extrazellulären Matrix assoziiertes Protein, das zur Stabilisierung von Hyaluronan und zur Organisation der Matrix beiträgt, indem es schwere Ketten kovalent auf Hyaluronan überträgt und so die Gewebehydratation sowie biomechanische Eigenschaften beeinflusst. In humanen Zellen überschneidet sich die ITIH5-Aktivität mit Signalwegen, die die Zell-Matrix-Adhäsion, die epitheliale Integrität und das stromale Remodeling regulieren, und beeinflusst dadurch Prozesse wie Migration und Invasion. Eine veränderte ITIH5-Expression wurde in verschiedenen Gewebekontexten mit Tumorbiologie und metastatischem Potenzial in Verbindung gebracht, was mit Rollen in der Homöostase der extrazellulären Matrix und in Programmen der Zellmotilität vereinbar ist. Diese Eigenschaften machen ITIH5 zu einem nützlichen Ziel, um zu untersuchen, wie hyaluronanreiche Matrizes Signaleigenschaften und Zellverhalten prägen.
ITI-H5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ITIH5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ITIH5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ITIH5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ITIH5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.