ITI-H4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403358

Übersicht

ITIH4 kodiert die schwere Kette H4 des Inter-α-Trypsin-Inhibitors (ITI-H4), ein leberangereichertes, sezerniertes Glykoprotein, das der Inter-α-Inhibitor-Familie zugeordnet ist und zur Organisation der extrazellulären Matrix sowie zur Modulation der Proteaseaktivität im Kreislauf beiträgt. ITI-H4 ist mit Entzündungs- und Akutphasenbiologie verknüpft; seine Regulation wird durch zytokinvermittelte Signalwege beeinflusst, die während Gewebeschädigung und Immunantworten die Zusammensetzung der Plasmaproteine verändern. Veränderte ITIH4-Expression und -Prozessierung wurden in mehreren Krankheitskontexten beschrieben, darunter entzündliche Erkrankungen und krebsassoziierte Proteom-Signaturen, was seine Eignung als mechanistisches und biomarkernahes Forschungsziel stützt. Als löslicher Faktor, der das extrazelluläre Milieu und Zell–Matrix-Interaktionen beeinflusst, ist ITIH4 relevant für die Untersuchung von Signalwegen, die Entzündung, Gewebeumbau und die Regulation von Mikroumgebungen steuern.

Das ITI-H4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ITIH4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ITIH4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ITIH4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ITI-H4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ITIH4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ITI-H4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ITIH4-Exone abzielen, die für die ITI-H4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ITIH4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ITI-H4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ITI-H4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ITIH4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ITI-H4 HDR-Plasmid (h) und ITI-H4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ITIH4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ITIH4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.