ITI-H2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402683-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ITI-H2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ITI-H2 Double-Nickase-Plasmid (h) und ITI-H2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ITIH2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ITI-H2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402683-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ITI-H2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402683-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ITIH2 kodiert die schwere Kette 2 des Inter-α-Trypsin-Inhibitors (ITI‑H2), ein sezerniertes, mit der extrazellulären Matrix assoziiertes Glykoprotein, das zur Stabilisierung hyaluronanreicher Matrizen beiträgt. Dies geschieht über Interaktionen mit Komponenten des Inter‑α‑Inhibitors sowie über damit verbundene Transferreaktionen, die die Gewebeorganisation unterstützen. Durch die Modulation der physikalischen Eigenschaften der perizellulären Matrix beeinflusst ITI‑H2 Zelladhäsion, Migration und entzündliche Umbauprozesse, die für Wundreaktionen und die Stromabiologie relevant sind. Eine veränderte Expression oder Prozessierung von Proteinen der Inter‑α‑Inhibitor‑Familie, einschließlich ITIH2, wurde bei entzündlichen Erkrankungen und in mehreren Krebszusammenhängen beschrieben, in denen die Zusammensetzung der extrazellulären Matrix Invasion und die Migration von Immunzellen prägen kann. ITIH2 dient daher als nützlicher Knotenpunkt, um ECM‑getriebene Signalwechselwirkungen, Proteaseregulation und mikroenvironmentabhängige Phänotypen in humanen Zellmodellen zu untersuchen.
ITI-H2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ITIH2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ITIH2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ITIH2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ITIH2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.