ITI-H1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403720-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ITI-H1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ITI-H1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ITI-H1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ITIH1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ITI-H1: sc-514541
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ITI-H1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403720-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ITI-H1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403720-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ITIH1 kodiert die schwere Kette 1 des Inter-α-Trypsin-Inhibitors (ITI‑H1), ein in der Leber gebildetes, sezerniertes Glykoprotein, das zur Organisation der extrazellulären Matrix beiträgt, indem es über den bikuninhaltigen Inter‑α‑Inhibitor‑Komplex kovalent an Hyaluronan gebunden wird. Diese Aktivität beeinflusst die Stabilität der perizellulären Matrix, Zell‑Matrix‑Interaktionen und entzündliche Mikroumgebungen, indem sie hyaluronanabhängige Prozesse moduliert. ITI‑H1 wird häufig im Kontext der Akut‑Phase‑Biologie, der Proteaseregulation im Extrazellulärraum und des Umbaus stromaler Matrizes untersucht. Veränderte ITIH1‑Expression oder genetische Variation wurden in entzündlichen und fibrotischen Situationen sowie in Studien zur tumorgeprägten Mikroumgebung beschrieben, was seine Eignung als Ziel in der Matrixbiologie und Krankheitsassoziationsforschung in humanen Modellen unterstreicht.
ITI-H1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ITIH1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ITIH1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ITIH1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ITIH1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.