ISGF-3γ p48 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421156-ACT

インターフェロン調節因子9（Interferon regulatory factor 9：Irf9、ISGF-3γ p48とも呼ばれる）は、STAT1およびSTAT2と協調してI型およびIII型インターフェロンシグナルを伝達するインターフェロン刺激遺伝子因子3（ISGF3）複合体の、DNA結合性コンポーネントをコードしています。インターフェロン受容体の結合とJAK/STATの活性化に続いて、IRF9はISGF3をインターフェロン刺激応答配列（ISRE）へ導くのを助け、抗ウイルス防御、抗原提示、自然免疫の制御に関わる転写プログラムを統括します。マウスモデルでは、Irf9の活性がサイトカインシグナル伝達ネットワークや、インターフェロン経路とより広範な炎症プログラムとのクロストークに影響を与えます。IRF9依存的な転写の破綻は、免疫応答性の変化、慢性炎症、ならびに免疫介在性疾患の機序に関連する宿主—病原体相互作用といった文脈で研究されています。

ISGF-3γ p48 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Irf9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ISGF-3γ p48 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Irf9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIrf9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ISGF-3γ p48の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIrf9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるISGF-3γ p48依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIrf9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるISGF-3γ p48経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。