Plasmide CRISPR d'Activation (m) ISGF-3γ p48: sc-421156-ACT

Le facteur régulateur de l’interféron 9 (Irf9), également appelé ISGF-3γ p48, code un composant de liaison à l’ADN du complexe « interferon-stimulated gene factor 3 » (ISGF3), qui coopère avec STAT1 et STAT2 pour transduire les signaux des interférons de type I et de type III. Après l’engagement du récepteur de l’interféron et l’activation de la voie JAK/STAT, IRF9 contribue à diriger ISGF3 vers les éléments de réponse aux gènes stimulés par l’interféron (ISRE), en coordonnant des programmes transcriptionnels impliqués dans la défense antivirale, la présentation d’antigènes et la régulation de l’immunité innée. Dans des modèles murins, l’activité d’Irf9 influence les réseaux de signalisation des cytokines et les interactions (crosstalk) entre les voies de l’interféron et des programmes inflammatoires plus larges. Une transcription dérégulée dépendante d’IRF9 a été étudiée dans des contextes de réponse immunitaire altérée, d’inflammation chronique et d’interactions hôte–pathogène pertinentes pour les mécanismes des maladies à médiation immunitaire.

ISGF-3γ p48 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Irf9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ISGF-3γ p48 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Irf9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Irf9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ISGF-3γ p48. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Irf9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ISGF-3γ p48 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ISGF-3γ p48 dans les cellules tumorales présentant une expression de Irf9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.