Plásmido CRISPR de Activación (h) ISGF-3γ p48: sc-400958-ACT

IRF9 codifica ISGF-3γ p48, un componente esencial de unión al ADN del complejo del factor 3 de genes estimulados por interferón (ISGF3), que se asocia con STAT1 y STAT2 para traducir la señalización del interferón de tipo I en programas transcripcionales. Tras la estimulación con IFN-α/β, ISGF3 se une a los elementos de respuesta a interferón (ISRE) para inducir factores de restricción antivirales, la maquinaria de presentación de antígenos y moduladores de la inmunidad innata, componentes centrales de la salida de la vía JAK–STAT. La actividad de IRF9 modela las respuestas celulares a la infección viral y a señales inflamatorias, y la desregulación de las redes de genes estimulados por interferón se ha implicado en el desequilibrio inmunitario y en la patología impulsada por interferón. Como regulador transcripcional nodal, IRF9 se estudia con frecuencia en interacciones huésped–patógeno, en la comunicación cruzada de la señalización de citocinas y en el control transcripcional de la inmunidad innata.

ISGF-3γ p48 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IRF9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ISGF-3γ p48 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IRF9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IRF9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ISGF-3γ p48. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IRF9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ISGF-3γ p48 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ISGF-3γ p48 en células tumorales con expresión de IRF9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.