Plasmide Double Nickase (h) ISG15: sc-400996-NIC

ISG15 code un modificateur de type ubiquitine induit par les interférons, rapidement stimulé par les interférons de type I et par le stress cellulaire. La conjugaison d’ISG15 à des substrats protéiques (ISGylation) est médiée par l’enzyme E1 UBA7, l’enzyme E2 UBE2L6 et des ligases E3 telles que HERC5, et elle est inversée par la déISGylase USP18, intégrant ainsi ISG15 aux réseaux de l’immunité innée et de la protéostasie. ISG15 influence la restriction antivirale, la régulation de l’amplitude de la signalisation des interférons et la modulation de la traduction ainsi que du renouvellement des protéines, avec, dans certains contextes, des activités extracellulaires supplémentaires de type cytokine. Une dérégulation d’ISG15/de l’ISGylation a été associée à des interactions hôte–pathogène altérées, à des interféronopathies, à des phénotypes inflammatoires et à une signalisation immunitaire liée au cancer, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des voies des interférons.

ISG15 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ISG15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ISG15. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ISG15. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ISG15.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.