ISCA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406334

Übersicht

ISCA2 kodiert ein konserviertes mitochondriales Protein, das für die Reifung und den Transport von Eisen-Schwefel-(Fe–S)-Clustern erforderlich ist und damit den Aufbau Fe–S-abhängiger Enzyme unterstützt, die an der oxidativen Phosphorylierung, der mitochondrialen Translation und der Redox-Homöostase beteiligt sind. Über seine Funktion im spät wirkenden ISC‑Signalweg trägt ISCA2 zur Aufrechterhaltung der Atmungskettenfunktion bei und schützt Zellen vor metabolischem Stress, der mit einem gestörten Elektronentransport zusammenhängt. Störungen von ISCA2 wurden mit mitochondrialer Dysfunktion und neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, die mit einer defekten Fe–S‑Cluster-Biogenese vereinbar sind. Entsprechend wird ISCA2 häufig im Kontext der mitochondrialen Qualitätskontrolle, des Energiestoffwechsels und von Signalwegen untersucht, die den Eisenhaushalt mit Genomstabilität und zellulären Stressantworten koppeln.

Das ISCA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ISCA2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ISCA2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ISCA2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ISCA2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ISCA2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ISCA2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ISCA2-Exone abzielen, die für die ISCA2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ISCA2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ISCA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ISCA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ISCA2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ISCA2 HDR-Plasmid (h) und ISCA2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ISCA2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ISCA2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.