ISCA1 Double Nickase Plasmid (m): sc-427272-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ISCA1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ISCA1 Double-Nickase-Plasmid (m) und ISCA1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Isca1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ISCA1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-427272-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ISCA1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-427272-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse ISCA1 (Isca1) kodiert einen mitochondriales A‑Typ‑Carrier-Protein, das an der Reifung von Eisen‑Schwefel‑(Fe‑S)-Clustern beteiligt ist und die Biogenese von [4Fe–4S]-Kofaktoren unterstützt, die für Komponenten der Atmungskette und zahlreiche metabolische Enzyme erforderlich sind. Über seine Rolle in der späten Phase der Fe‑S-Assemblierung trägt ISCA1 zur oxidativen Phosphorylierung, zur Redoxhomöostase und zur Aufrechterhaltung der mitochondrialen Funktion unter wechselnden zellulären Eisenbedingungen bei. Störungen der Fe‑S-Cluster‑Wege können die Stabilität der mitochondrialen Genomaufrechterhaltung und des Elektronentransports beeinträchtigen und verknüpfen eine ISCA1‑assoziierte Dysfunktion mit Phänotypen bioenergetischen Stresses, die für Mechanismen neuroentwicklungsbedingter und neuromuskulärer Erkrankungen relevant sind. Daher wird Isca1 häufig im Kontext des mitochondrialen Stoffwechsels, der Stresssignalgebung und Fe‑S‑abhängiger Enzymnetzwerke untersucht.
ISCA1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Isca1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Isca1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Isca1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Isca1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.