IRX1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421153

Descripción general

Irx1 codifica el factor de transcripción homeobox Iroquois IRX1, un regulador nuclear de unión al ADN que pauta los tejidos embrionarios y guía la especificación de linajes. En el desarrollo del ratón, IRX1 contribuye a programas transcripcionales que gobiernan la morfogénesis, las decisiones de destino celular y la organización espacial de los primordios de órganos, integrándose en redes reguladoras más amplias impulsadas por genes homeobox. La expresión desregulada de IRX1 o alteraciones en su control regulatorio se han asociado con anomalías del desarrollo y se han estudiado en el contexto de estados de diferenciación aberrantes relevantes para la biología del cáncer. Como nodo transcripcional, IRX1 se investiga habitualmente por sus genes diana aguas abajo, sus dependencias del estado de la cromatina y su interrelación con vías de señalización que determinan la identidad tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO IRX1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Irx1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Irx1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Irx1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IRX1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Irx1 para la investigación de la señalización de IRX1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Irx1 críticos para la función de IRX1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Irx1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido IRX1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido IRX1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Irx1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IRX1 (m) y el plásmido HDR IRX1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Irx1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Irx1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.