IRS-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402033

Panoramica

Il substrato del recettore dell’insulina 4 (IRS4) è una proteina adattatrice citoplasmatica che collega i recettori dell’insulina e dei fattori di crescita insulino-simili attivati alle reti di segnalazione a valle. Attraverso interazioni che promuovono l’attivazione delle vie PI3K–AKT–mTOR e RAS–MAPK, IRS-4 influenza proliferazione, metabolismo e sopravvivenza cellulari, con ruoli dipendenti dal contesto distinti da quelli di altri membri della famiglia IRS. Alterazioni dell’espressione e della segnalazione di IRS4 sono state associate a una deregolazione della segnalazione dei fattori di crescita nella biologia dei tumori e a fenotipi più ampi legati alla segnalazione metabolica, rendendolo rilevante per analizzare il crosstalk tra recettori tirosin-chinasici. Lo studio di IRS-4 consente indagini meccanicistiche sulla dinamica della trasduzione del segnale, sulla regolazione tramite feedback e sul rimodellamento delle vie di segnalazione in condizioni di stress oncogenico o metabolico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IRS-4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IRS4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IRS4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IRS4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IRS-4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IRS4 per lo studio della segnalazione di IRS-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IRS4 critici per la funzione di IRS-4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IRS4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IRS-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IRS-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IRS4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IRS-4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IRS-4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IRS4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IRS4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.