IRS-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402033

Übersicht

Das Insulinrezeptor-Substrat 4 (IRS4) ist ein zytoplasmatisches Adapterprotein, das aktivierte Insulin- und Insulin-like-Growth-Factor-Rezeptoren mit nachgeschalteten Signalnetzwerken koppelt. Durch Interaktionen, die die Aktivierung der PI3K–AKT–mTOR- und der RAS–MAPK-Signalwege fördern, beeinflusst IRS-4 die Zellproliferation, den Stoffwechsel und das Überleben von Zellen – mit kontextabhängigen Funktionen, die sich von denen anderer Mitglieder der IRS-Familie unterscheiden. Veränderungen der IRS4-Expression und der Signalübertragung wurden mit einer fehlregulierten Wachstumsfaktor-Signalgebung in der Krebsbiologie sowie mit breiteren Phänotypen der metabolischen Signalgebung in Verbindung gebracht, was IRS-4 für die Analyse des Crosstalks von Rezeptor-Tyrosinkinasen relevant macht. Die Untersuchung von IRS-4 unterstützt mechanistische Studien zur Dynamik der Signaltransduktion, zur Feedback-Regulation und zur Neuprogrammierung von Signalwegen unter onkogenem oder metabolischem Stress.

Das IRS-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des IRS4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des IRS4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von IRS4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IRS-4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von IRS4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IRS-4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf IRS4-Exone abzielen, die für die IRS-4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere IRS4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IRS-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom IRS-4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des IRS4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IRS-4 HDR-Plasmid (h) und IRS-4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von IRS4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten IRS4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.