IRS-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421151

Übersicht

Irs3 kodiert das Insulinrezeptorsubstrat 3 (IRS-3), einen zytoplasmatischen Adapter, der aktivierte Insulin- und IGF-1‑Rezeptoren an nachgeschaltete Signalübertragung über die PI3K‑AKT‑ und MAPK‑Signalwege koppelt. Durch die Bereitstellung von Phosphotyrosin‑Dockingstellen für SH2‑Domänen‑Proteine unterstützt IRS-3 die Regulation von Glukoseaufnahme, Glykogensynthese, Lipidstoffwechsel und wachstumsfaktorabhängiger Proliferation. In Mausmodellen ist eine veränderte Signalgebung der IRS‑Familie allgemein relevant für Insulinresistenz, adipositasassoziierte metabolische Dysfunktion und entzündliche Crosstalk‑Mechanismen, die die Energiehomöostase beeinflussen. Die Untersuchung von IRS-3 hilft, gewebespezifische Signaling‑Bias und kompensatorisches Netzwerkverhalten zwischen IRS‑Paralogen in der Stoffwechsel- und Endokrinbiologie zu analysieren.

Das IRS-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Irs3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Irs3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Irs3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IRS-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Irs3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IRS-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Irs3-Exone abzielen, die für die IRS-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Irs3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IRS-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IRS-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Irs3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IRS-3 HDR-Plasmid (m) und IRS-3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Irs3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Irs3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.