IRP-2 Double Nickase Plasmid (m): sc-425717-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IRP-2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IRP-2 Double-Nickase-Plasmid (m) und IRP-2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Ireb2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IRP-2: sc-33680
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IRP-2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-425717-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Ireb2** kodiert das **iron regulatory protein 2 (IRP-2)**, einen RNA-bindenden Faktor, der die Eisenhomöostase posttranskriptionell steuert, indem er **eisenresponsive Elemente (IREs)** in Ziel-mRNAs wie denen des **Transferrinrezeptors 1** und von **Ferritin** erkennt. Durch die eisen- und sauerstoffabhängige Regulation der IRP-2-Stabilität verknüpft **Ireb2** die zelluläre Eisenverfügbarkeit mit Signalwegen, die den mitochondrialen Stoffwechsel, das Redoxgleichgewicht sowie die Biosynthese von Häm- und Eisen-Schwefel-Clustern steuern. Eine Störung der IRP-2-Aktivität kann die Pools labilen Eisens und die Antworten auf oxidativen Stress verschieben und so eine Verbindung zwischen Eisen-Dyshomöostase und Neurodegeneration, anämieassoziierten Phänotypen sowie inflammatorischer Signalgebung in mehreren Geweben herstellen. Diese Eigenschaften machen **Ireb2** zu einem nützlichen Lokus für mechanistische Untersuchungen der eisenabhängigen Genregulation, der Anfälligkeit für Ferroptose und der metabolischen Anpassung in Mausmodellen und kultivierten Zellen.
IRP-2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Ireb2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Ireb2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Ireb2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Ireb2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.